PRÁCTICA 5 TINCIÓN DE GRAM GRAM Y DE MANEVAL MANEVAL I.
Introducción
TINCIÓN DE GRAM El método de tinción diferencil m!" im#ortnte $"do en %cteriolo&' e" l tinción de Grm( llmd "' en )onor )onor l Dr* Dr* +n" C)ri"tin Grm* E"te método di,ide di,ide l" %cteri" en do" do" &rnde" &r$#o"( l" l" Grm-ne&ti," . l" Grm-#o"iti,"* E"to e" e"encil #r l cl"i/cción cl"i/cción . diferencición diferencición de microor&ni"mo"* microor&ni"mo"* L rección l tinción de Grm e"t! %"d en l diferenci en l com#o"ición 0$'mic de l #red cel$ cel$l lrr %ct %cter eri in n** L" L" %ct %cter eri i"" Grm# Grm#o" o"it iti, i," " tien tienen en $n $n &r$e &r$e" " c# c# de #e#t #e#tid ido& o&li lic cno no o m$re m$re'n 'n( ( mien mientr tr" " 0$e 0$e e"t e"t c# c# e" m!" m!" /n /n en l" l" Grm Grm-ne&ti," . e"t! roded roded #or $n %ic# %ic# li#'dic e1tern* e1tern* El Pe#tido&licno Pe#tido&licno e" $n #oli"c!rido formdo #or do" "$%$nidde" 0$'mic"( N-cetil&l$co"min . cido Ncetilm$r!mico* 2A"c( Alde( Arr$é 3 Vl,erde( 4647
8i&$re 9: Microfoto&rf' de #red cel$lr cel$lr de %cteri %cteri Grm-ne Grm-ne ti,
8i&$re 6 Microfoto&rf' de $n #red cel$lr De %cteri Grm-Po"iti, 6
M$rr. 24;7 "e<l 0$e =l tinción diferencil re0$iere el $"o de l meno" 9 recti,o" 0$'mico" 0$e "e #licn en "ec$enci $n froti" />do #or clor* El #rimer recti,o e" llmdo tinción #rimri o colornte #rimrio* ?$ f$nción e" im#rtir color tod" l" cél$l"* Con el o%>eti,o de e"t%lecer $n contr"te de color( el "e&$ndo recti,o $"do e" $n &ente decolornte( el c$l #$ede decolorr l cél$l com#let o "olo #rte de ell* El recti,o /nl( el 9: E"tr$ct$r de0$e l : Pred 8i&$re E"tr$ct$r colornte de contr"te( le d l" cél$l" 8i&$re decolord" $n color contr"t con de el l Pred Cel$lr no de #$ede %cteri Grm-#o"iti, Cel$lr de %cteri Grm-ne&ti, del colornte #rimrio* El colornte de contr"te "er %"or%ido #or cél$l" 0$e no )n #erdido el colornte #rimrio* De e"t mner( ti#o" de cél$l" o "$" e"tr$ct$r" "e #$eden di"tin&$ir $n" de otr" en f$nción del colornte 0$e e" %"or%ido@* 8$ndmento de l tinción: Tinción Primaria( ?e $tili Cri"tl Violet( 0$e tio" in"ol$%le" con e"te* El com#le>o cri"tl ,iolet-.odo "ir,e #r inten"i/cr el color del tenido* L$e&o de e"o "e &re& el Agente decolorante* ComBnmente "e $tili lco)ol et'lico l 5 o ceton* El etnol tiene do%le f$nción como de")idrtnte de #rote'n" . "ol,ente de l'#ido"* El lco)ol di"$el,e lo" l'#ido" de l #rte e1tern de l #red cel$lr Grm-ne&ti,( )ciendo l #red m!" #oro"* De e"t mner( el com#le>o Cri"tl ,iolet-.odo e" remo,ido de l c# de m$rein m!" /n de l" %cteri" Grmne&ti,"( mientr" 0$e l #red m!" &r$e" de l" Grm-#o"iti," retiene el tinte en "$ interior( colore!ndo"e de color morado o violeta* L $ltim rección e" l Tinción de Contraste con ?frnin( $n colornte %!"ico* E"te tinte "e $tili #r te
4
8$ente: A"c( Alde( Arr$é 3 Vl,erde 24647* cteri" Grm#o"iti," . Grmne&ti," K/&$r* Rec$#erdo de
TINCIÓN DE MANEVAL
En 64( Ló#e( A* J* r>"( R* "e<lron 0$e =M$c)" %cteri" e"t!n roded" #or com#$e"to" 0$'mico" "$#er/cile" 0$e "e tición l clor . l,do l" di"$el,en* Por lo tnto( el me>or método #r o%"er,rl" e" el de l" tincione" ne&ti,"* Lo" colornte" $"do" "on: Maneval A (Rojo Congo), "ir,e( "o%retodo( como indicdor del #+( e" decir( de indicdor de l cide de $n medio* En "$ form %!"ic el ro>o con&o e" ro>o* C$ndo el #+ e"t! com#rendido entre 9* . 5*4 "e ,$el,e ro" . el colornte Maneval B (Fucsina cida). El o%>eti,o de e"t #r!ctic e" conocer lo" f$ndmento" molec$lre" de l colorción de Grm . Mne,l( "i como l o%"er,ción de %cteri" Grm#o"iti," . 9
Grmne&ti,"* Tm%ién l o%"er,ción de c!#"$l %cterin en Klebsiella pneumoniae* Mirnd( M* 267*
II.
Material y Métodos
Materiales Equipos Lminill" c$%reo%>eto" 9 Micro"co#io" Lmin" #orto%>eto" Mec)ero de $n"en Aceite de inmer"ión Colornte" #r l tinción de Mne,l 6 I"o#o" de mder Colornte" #r l tinción de Grm* 5 e"t$dinte" 2m$e"tr7 Re>ill de "o#orte o de tinción Gotero"
Metodología
Coloracin !e Gram
Relir $n froti" de "rro dentrio en $n l!min #orto%>eto"* Permit 0$e lo" froti" "e "e0$en l ire . l$e&o f'>elo" con clor* Ter ct$r d$rnte do" min$to"* L,r "$,emente con &$* Decolorr con lco)ol et'lico l 5* Not: No "o%redecolorr( &re&$e el lco)ol &ot &ot )"t 0$e e"te "l& c"i clro( "olo li&ermente $l* L,r "$,emente con &$* A&re&r l "frnin #r l tinción de contr"te( . de>r ct$r d$rnte do" min$to"* L,r "$,emente con &$* ?ecr l #re#rción* Por Bltimo( e1minr l micro"co#io con el o%>eti,o 6 de inmer"ión con ceite de cedro* Coloracin !e Mane"al
Colocr $n &ot de Mane"al A 2Ro>o Con&o7 en $n lminill "o%re el froti" . />do( )ciendo mo,imiento" &irtorio" con el "* E1tender l "$"#en"ión de mner 0$e 0$ede $n #el'c$l del&d* De>r "ecr l #re#rción tem#ert$r m%iente* N 8IJAR EL 8RTI? AL CALR* C$%rir l #re#rción con Mane"al B 28$c"in !cid7 .
de>r 0$e ctBe d$rnte do" min$to"* L,r "$,emente con &$ corriente de l ll,e . "ec el froti" medinte $n li&ero contcto con $n toll de ##el* %"er,r l micro"co#io Con el o%>eti,o de inmer"ión* L" c!#"$l" "e o%"er,n como )lo" incoloro"* El e"#cio intercel$lr "e o%"er, de $n color o"c$ro . l" cél$l" %cterin" de color ro>o* III.
Resultados
IV.
Comentario 5
V.
Referencias Bibliogr!cas
-
A"c(A*O Alde(A*O Arr$é(F* 3 Vl,erde(F* 24647* Bacterias Grampositi"as # Gramne$ati"as* Di"#oni%le en: )tt#:%iolo&imedic*%lo&"#ot*#e%cteri"-&rm#o"iti,"-.-&rm-ne&ti,"*
-
er&e.( D,id +*O +olt( Jo)n G*O Frie&( Noel R*O ?net)( Peter +* A* 267* Ber$e#%s manual o& !eterminati"e bacteriolo$# * Q edición* Li##incott illim" 3 ilHin"*
-
Ló#e( A* J* r>"( R* 2647* Manual !e Laboratorio para Bacteriolo$'a # Micolo$'a * De#rtmento de cteriolo&'* 8MVS-NAM*
-
Mdi&n( M* TO MrtinHo J*( PrHer J* 247* Biolo$'a !e los Microor$anismos( 6Q edición* Mdrid( E"#<* PEAR?N Prentice +ill*
-
Mirnd( M* 267* Material !i!)ctico para Laboratorio !e Bacteriolo$'a * Micolo$'a * De#rtmento de cteriolo&'* 8MVSU NAM*
-
M$rr.( P* 24;7* Microbiolo$'a M+!ica * 5t edición* Mdrid( E"#<* Editoril El"e,ier Mo"%.*
VI.
"ne#os
Ane,o -. /reparacin !e la coloracin !e Gram
;
Te
L,r "$,emente con &$
Te
L,r "$,emente con &$
A#licr ceton &ot &ot
L,r "$,emente con &$
A#licr l$&ol "$,emente )"t c$%rir l m$e"tr
L,r "$,emente con $
?ecr l ire li%re
8$ente: er&e.( D,id +*O +olt( Jo)n G*O Frie&( Noel R*O ?net)( Peter +* A* Ane,o 0. /reparacin !el bacteriolo$# colorante Mane"al 267: Ber$e#%s *K8i&$r* Li##incott manual o& !eterminati"e
8$ente: Ló#e( A* J* r>"( R* 2647* Manual !e Laboratorio para
Bacteriolo$'a # Micolo$'a* K/&$r* De#rtmento de cteriolo&'* 8MVS-
ANE12 3. Al$unos pasos !e la coloracin Gram
4. Bacterias * Gram78 colorea!as con NIVER?IDAD ANE12 NACINAL DE5Gram6 TRJILL
8ACLTAD DE CIENCIA? ILÓGICA? E?CELA ACADWMICA DE CIENCIA? ILÓGICA?
•
ALMN:
•
PR8E?RE?:
•
ME?A:
•
CR?:
46;