BAKTERIOLOGI MEDIA PERTUMBUHAN BAKTERI
OLEH : Ni Made Yuni Trisna Dewi
(P07134013041)
KEMENTRIAN KESEHATANN REPUBLIK INDONESIA POLITEKNIK KESEHATAN DENPASAR ANALIS KESEHATAN 2013/2014
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 LATAR BELAKANG
Dalam bekerja di laboratorium, salah satu tugas analis kesehatan adalah memeriksa mikroorganisme pada manusia yang dapat menimbulkan penyakit (patogen). Salah satu pemeriksan yang dilakukan adalah identifikasi bakteri. Identifikasi bakteri dilakukan dengan pengecatan kemudian dilakukan pengamatan dengan mikroskop. Tetapi sebelum itu semua dilakukan, bakteri haruslah diperbanyak dengan cara menanam atau membenihkannya di suatu bahan atau substrat yang mengandung nutrisi (media) terlebih dahulu. Mikroba seperi makhluk hidup lainnya memerlukan nutrisi pertumbuhan. Pengetahuan akan nutrisi pertumbuhan ini akan membantu di dalam mengkultivasi, mengisolasi dan mengidentifikasi mikroba. Mikroba memiliki karakteristik dan ciri yang berbeda-beda di dalam persyaratan pertumbuhannya. Ada mikroba yang bisa hidup hanya pada media yang mengandung sulfur dan ada pula yang tidak mampu hidup dan seterusnya. Karakteristik persyaratan pertumbuhanmikroba
inilah
yang
menyebabkan
bermacam-
macamnya media penunjang pertumbuhanmikroba. Untuk menumbuhkan dan mengembangbiakan mikroba, diperlukan suatu substrat yang disebut media. Keragaman yang luas dalam hal tipe nutrisi di antara mikroba diimbangi tersedianya berbagai media yang banyak macamnya untuk kultivas Media berfungsi untuk menumbuhkan mikroba, isolasi, memperbanyak jumlah, menguji sifat-sifat fisiologi dan perhitungan jumlah mikroba, dimana dalam proses pembuatannya harus disterilisasi dan menerapkan metode aseptis untuk menghindari kontaminasi pada media. .Kandungan didalam setiap media berbeda-beda tergantung kebutuhan dari mikroba yang akan ditanam. Selain nutrisi ada banyak faktor lain yang harus diperhatikan misalnya pH, temperatur, dan sebagainya.
1.2 RUMUSAN MASALAH
1. Apa yang dimaksud dengan media pertumbuhan ?
2. Apa manfaat/fungsi dari media pertumbuhan tersebut? 3. Apa komponen penyusun media pertumbuhan? 4. Apa saja jenis/klasifikasi media pertumbuhan ? 5. Apa saja persyaratan media pertumbuhan ?
1.3 TUJUAN
1. Untuk mengetahui definisi dari media pertumbuhan. 2. Untuk mengetahui manfaat atau fungsi dari media pertumbuhan. 3. Untuk mengetahui komponen penyusun media pertumbuhan. 4. Untuk mengetahui jenis atau klasifikasi media pertumbuhan. 5. Untuk mengetahui persyaratan media pertumbuhan.
1.4 METODE
Pembuatan paper kelompok kami ini dibuat dengan mengguankan metode kepustakaan, yaitu mengambil referensi dari buku-buku pedoman dan internet demi menyempurnakan hasil dari pembuatan paper ini.
BAB II PEMBAHASAN
2.1 DEFINISI MEDIA
Media adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat hara (nutrient) yang berguna untuk membiakkan mikroba. Dengan Den gan mempergunakan mempergunak an bermacam-macam bermaca m-macam media dapat dilakukan isolasi, perbanyakan, pengujian sifat-sifat fisiologis dan perhitungan jumlah mikroba Medium adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran nutrisi atau zat-zat hara (nutrien) yang digunakan untuk menumbuhkan mikroba. Media pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat makanan (nutrisi) yang digunakan oleh suatu mikroorganisme untuk tumbuh dan berkembangbiak berkembangbiak pada media tersebut. Mikroorganisme memanfaatkan memanfaatkan nutrisi yang disediakan dari media berupa moleku l-molekul yang selanjutnya dirakit untuk menyusun komponen sel dan memperbanyak diri sehingga sel-sel tersebut dapat dimanfaatkan.. Dengan adanya media pertumbuhan dapat dilakukan dilakukan isolasi mikroorganisme menjadi kultur tunggal (kultur murni) dan juga memanipulasi mikroorganisme yang didapatkan untuk kepentingan tertentu. Oleh karena bakteri yang berbeda memerlukan kebutuhan akan nutrisi yang berbeda pula , sehingga dikembangkan berbagai macam media pertumbuhan untuk digunakan dalam diagnosa mikrobiologi. Media pertumbuhan bakteri atau media kultur bakteri adalah cairan atau gel yang di design untuk mendukung pertumbuhan mikroorganisme dan sel. Terdapat dua jenis utama media pertumbuhan yaitu media yang digunakan untuk kultur pertumbuhan sel tumbuhan atau binatang dan jenis yang kedua yaitu kultur mikrobiologi yang digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme seperti bakteri dan jamur. Dapat disimpulkan media adalah suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi (nutrient) yang dipakai untuk menumbuhkan mikroba. Faktor – Faktor – faktor faktor yang menyebabkan berhentinya pertumbuhan mikroba antara lain:
a. Penyusutan konsentrasi nutrisi yang dibutuhkan dalam pertumbuhan mikroba karena habis terkonsumsi. b. Produk akhir metabolisme yang menghambat pertumbuhan mikroba karena terjadinya inhibisi dan represi. Medium dapat dibuat beracam-macam bergantung kepada keperluannya. Bahan yang paling umum digunakan untuk membuat medium menjadi padat dapat dipakai agar. Praktisnya semua media yang digunakan untuk penyediaan medium mikroba sudah secara komersial dalam bentuk bubuk dan juga dalam bentuk siap pakai. Dalam penyediaan media, kebanyakan bersifat alamiah sudah sud ah mengandung semua nutrien yang dibutuhkan. Oleh karena itu, dalam pembuatan medium mikroba dalam lingkup mikrobiologi sangat berkaitan dengan sterilisasi. Hal ini agar medium yang dibuat dapat berhasil. Jadi, proses sterilisasi pun perlu perlu dipelajari lebih dalam. 2.2 MANFAAT MEDIA
Mikroorganisme harus dibiakkan di laboratorium pada bahan nutrien yang berperan penting untuk pertumbuhan dan perkembangbiakannya. Susunan b ahan nutrien, baik bahan alami maupun sintetik/buatan, yang dipergunakan untuk pertumbuhan dan perkembangan bakteri. Dengan medium pertumbuhan dapat dilakukan hal-hal berikut : 1. Isolat mikroorganisme menjadi kultur murni 2. Memanipulasi komposisi media pertumbuhannya 3. Menumbuhkan mikroorganisme 4. Memperbanyak jumlah 5. Menguji sifat-sifat fisiologisnya 6. Menghitung jumlah mikroba 7. Sebagai tempat tinggal 8. Sumber makanan 9. Penyedia nutrisi bagi mikroorganisme yang akan dibiakan pada media 10. Untuk membiakkan, mengasingkan, mengirimkan dan meyimpan mikroorganisme dalam waktu yang lama di laboratorium. Media juga dapat digunakan 11. Untuk mempelajari sifat-sifat koloni/pertumbuhan mikroorganisme, serta sifat-sifat biokimiawinya. Di
dalam laboratorium mikrobiologi kedokteran media juga dapat
digunakan untuk pembuatan antigen, toksin dan untuk pasasi kuman dengan tujuan perubahan virulensi dan lain-lain.
2.3 KOMPONEN MEDIA 2.3.1 Nutrisi yang Diperlukan oleh Bakteri
Suatu media pertumbuhan memerlukan suatu kandungan senyawa yang dapat mendukung kelangsungan hidup mikroorganisme di dalamnya, dimana kandungan tersebut disebut dengan nutrien. Nutrien dalam media pertumbuhan harus mengandung seluruh elemen yang penting untuk sintesis biologik organisme baru. Nutrient diklasifikasikan berdasarkan elemen yang mereka suplai. Terdapat bermacam nutrien yang diperlukan oleh bakteri untuk tumbuh pada media pertumbuhan tersebut, diantaranya yaitu yang bersumber dari : 1. Sumber Karbon
Tumbuhan-tumbuhan dan beberapa bakteri mampu mengunakan energi fotosintetik untuk mereduksi karbondioksida pada penggunaan air. Organisme ini termasuk kelompok autotrof, makhluk hidup yang tidak membutuhkan nutrient organik untuk pertumbuhannya. Autotrof lain adalah khemolitotrof, organisme yang menggunakan substrat anorganik seperti hidrogen atau thiosulfat
sebagai
reduktan
dan
karbondioksida
sebagai
sumber
karbon.
Heterotrof membutuhkan karbon organik untuk pertumbuhannya, dan karbon organik tersebut harus dalam bentuk yang dapat diasimilasi. Contohnya, naphthalene dapat menyediakan semua karbon dan energi yang dibutuhkan untuk pertumbuhan respirasi heterotropik, tetapi sangat sedikit organisme yang memiliki jalur metabolik yang perlu untuk asimilasi naphthalene. Sebaliknya, glukosa, dapat membantu pertumbuhan fermentatif atau respirasi dari banyak organisme. Adalah penting bahwa substrat pertumbuhan disuplai pada tingkatan yang cocok untuk galur mikroba yang akan ditumbuhkan. Karbondioksida dibutuhkan pada sejumlah reaksi biosintesis.
Keperluan akan Zat Karbon Organisme yang berfotosintesis dan bakteri yang memperoleh energi dari oksidasi senyawa organik menggunakan secara khas bentuk karbon yang paling teroksidas, CO2, sebagai
satu-satunya sumber utama karbon selular. Perubahan CO2, menjadi unsur pokok sel organik adalah
proses
reduktif,
yang
memerlukan
pemasukan
bersih
energi.
Semua organisme lain memperoleh karbonnya terutama dari zat gizi organik. Karena kebanyakan substrat organik adalah setingkat dengan oksidasi umum sebagai unsur pokok sel organik, zat-zat itu biasanya tidak usah menjalani reduksi pertama yang berguna sebagai sumber karbon sel. Selain untuk memenuhi keperluan biosintetik akan karbon, maka substrat organik harus memberikan keperluan energetik untuk sel itu. Akibatnya sebagian besar daripada karbon yang terdapat pada substrat organik memasuki lintasan lintasan metabolisme yang menghasilkan energi dan akhirnya dikeluarkan lagi dari sel, sebagai CO2 (hasil utama dalam metabolisme pernapasan yang menghasilkan energi atau sebagai campuran CO2 dan senyawa organik). Jadi, substrat organik biasanya mempunyai peran gizi yang lengkap.
2. Sumber Nitrogen
Nitrogen merupakan komponen utama protein dan asam nukleat, yaitu sebesar lebih kurang 10 % dari berat kering sel bakteri. Nitrogen mungkin disuplai dalam bentuk yang berbeda, dan mikroorganisme beragam kemampuannya untuk mengasimilasi nitrogen. Hasil akhir dari seluruh jenis asimilasi nitrogen adalah bentuk paling tereduksi yaitu ion ammonium +
(NH4 ). Banyak mikroorganisme memiliki kemampuan untuk mengasimilasi nitrat (NO3) dan nitrit (NO2) secara reduksi dengan mengubahnya menjadi amoniak (NH3). Jalur asimilasi ini berbeda dengan jalur dissimilasi nitrat dan nitrit. Jalur dissimilasi digunakan oleh organisme yang menggunakan ion ini sebagai elektron penerima terminal dalam respirasi, proses ini dikenal sebagai denitrifikasi, dan hasilnya adalah gas nitrogen (N2), yang dikeluarkan ke atmosfer. Kemampuan untuk mengasimilasi N2 secara reduksi melalui NH3, yang disebut fiksasi nitrogen, adalah sifat untuk prokariota, dan relatif sedikit bakteri yang memiliki kemampuan metabolisme ini. Proses tersebut membutuhkan sejumlah besar energi metabolik dan tidak dapat aktif dengan adanya oksigen. Kemampuan fiksasi nitrogen ditemukan pada beragam bakteri yang berevolusi sangat berbeda dalam strategi biokimia untuk melindungi enzim fixing-nitrogen nya dari oksigen. +
Kebanyakan mikroorganisme dapat menggunakan NH4 sebagai sumber nitrogen utama, +
dan banyak organisme memiliki kemampuan untuk menghasilkan NH4 dari amina (R-NH2) atau
dari asam amino (RCHNH2COOH). Produksi amoniak dari deaminasi asam amino disebut ammonifikasi. Amoniak dimasukkan ke dalam bahan organik melalui jalur biokomia yang melibatkan glutamat dan glutamine.
3. Sumber Belerang
Belerang adalah komponen dari banyak substansi organik sel. Belerang membentuk bagian struktur beberapa koenzim dan ditemukan dalam rantai samping cisteinil dan merionil protein. Belerang dalam bentuk asalnya tidak dapat digunakan oleh tumbuhan atau hewan. 2-
Namun, beberapa bakteri autotropik dapat mengoksidasinya menjadi sulfat (SO4 ). Kebanyakan mikroorganisme dapat menggunakan sulfat sebagai sumber belerang, mereduksi sulfat menjadi hidrogen sulfida (H2S). Beberapa mikroorganisme dapat mengasimilasi H2S secara langsung dari medium pertumbuhan tetapi senyawa ini dapat menjadi racun bagi banyak organisme. Kedua unsur ini yaitu belerang dan nitrogen terdapat dalam sel dalam bentuk tereduksi, sebagai gugus sulfhidril dan amino. Sebagian besar mikroorganisme mampu menampung unsurunsur ini dalam bentuk oksida dan mereduksi sulfat dan juga nitrat. Sumber nitrogen yang paling lazim untuk mikroorganisme adalah garam-garam ammonium. Beberapa prokariot mampu mereduksi nitrogen molekul (N2 atau dinitrogen). Mikroorganisme lain memerlukan asam-asam amino sebagai sumber nitrogen, jadi yang mengandung nitrogen organik. Tidak semua mikroorganisme mampu mereduksi sulfat, beberapa diantaranya memerukan H2S atau sistein sebagai sumber S.
Keperluan Akan Nitrogen dan Belerang Nitrogen dan belerang terdapat pada senyawa organik sel terutama dalam bentuk yang terinduksi masing-masing sebagai gugus amino dan sulfhidril. Kebanyakan organisme fotosintetik mengasimilasi kedua unsur ini dalam keadaan anorganik yang teoksidasi, sebagai nitrat dan sulfat, jadi penggunaan biosintetiknya meliputi reduksi pendahuluan. Banyak bakteri nonfotosintetik dan cendawan dapat juga memenuhi keperluannya akan nitrogen dan belerang dari nitrat dan sulfat. Beberapa mikroorganisme tidak dapat mengadakan reduksi salah satu atau kedua anion ini dan harus diberikan unsur dalam bentuk tereduksi. Keperluan akan sumber nitrogen yang tereduksi agak umum dan dapat dipenuhi oleh persediaan nitrogen sebagai garamgaram ammonium. Keperluan akan belerang tereduksi lebih jarang, bahan itu dipenuhi dari
persediaan sulfida atau dari senyawa organik yang mengandung m engandung satu gugus sulfhidril (misalnya sisteine). Beberapa bakteri dapat juga memanfaatkan sumber nitrogen alam yang paling banyak, yaitu N2. Proses asimilasi nitrogen ini disebut fiksasi nitrogen dan meliputi reduksi permulaan N2 menjadi amino.
4. Sumber Phospor 3-
Fosfat (PO4 ) dibutuhkan sebagai komponen ATP, asam nukleat dan sejumlah koenzim seperti NAD, NADP dan flavin. Selain itu, banyak metabolit, lipid (fosfolipid, lipid A), komponen dinding sel (teichoic acid), beberapa polisakarida kapsul dan beberapa protein adalah bergugus fosfat. Fosfat selalu diasimilasi sebagai fosfat anorganik bebas (Pi).
5. Sumber Mineral 2+
Sejumlah besar mineral dibutuhkan untuk fungsi enzim. Ion magnesium (Mg ) dan ion 2+
ferrum (Fe ) juga ditemukan pada turunan porfirin yaitu: magnesium dalam molekul klorofil, 2+
+
dan besi sebagai bagian dari koenzim sitokrom dan peroksidase. Mg dan K keduanya sangat 2+
penting untuk fungsi dan kesatuan ribosom. Ca dibutuhkan sebagai komponen dinding sel gram positif, meskipun ion tersebut bebas untuk bakteri gram negatif. Banyak dari organisme +
laut membutuhkan Na untuk pertumbuhannya. Dalam memformulasikan medium untuk pembiakan kebanyakan mikroorganisme, sangatlah penting untuk menyediakan sumber +
+
+
potassium, magnesium, kalsium, dan besi, biasanya dalam bentuk ion-ion (K , Mg2 , Ca2 , dan +
+
+
+
+
+
Fe2 ). Banyak mineral lainnya (seperti Mn2 , Mo2 , Co2 , Cu2 , dan Zn2 ) dibutuhkan: mineral ini kerapkali terdapat dalam air kran atau sebagai kontaminan dari kandungan medium lainnya.
6. Sumber Oksigen
Untuk sel oksigen tersedia dalam bentuk air. Selanjutnya oksigen juga terdapat dalam CO2 dan dalam bentuk senyawa organik. Selain itu masih banya organisme yang tergantung dari oksigen molekul (O2 atau dioksigen). Oksigen yang berasal dari molekul oksigen hanya akan diinkorporasi ke dalam substansi sel kalau sebagai sumber karbon digunakan metana atau hidrokarbon aromatic yang berantai panjang. Menilik hubungannya dengan oksigen dapat dibedakan sekurang-kurangnya tiga kelompok organisme: organisme aerob obligat yang mampu
menghasilkan energi hanya melalui respirasi dan dengan demikian tergantung pada oksigen. Organisme anaerob obligat hanya dapat hidup dalam lingkungan bekas oksigen. Untuk organisme ini O2 bersifat toksik. Mikroorganisme anaerob fakultatif tumbuh dengan adanya O2 udara, jadi bersifat aerotoleran; tetapi organisme ini tidak dapat memanfaatkan O2, tetapi memperoleh energi semata-mata dari peragian. Jenis bakteri anaerob fakultatif lain (Enterobacteriaceae) dan banyak ragi dapat beralih dari peroleh energi dengan respirasi (dengan adanya O2) ke peragian (tanpa O2).
2.3.2 Tipe-Tipe Nutrisi Utama Bakteri Tipe
Sumber
Sumber
Contoh genus
Energi untuk Karbon Pertumbuhan
Untuk Pertumbuhan
Fototrof
Cahaya
CO2
Chromatium
Fotoautotrof
Cahaya
Senyawa
Rhodopseumdomonas
Fotoheterotrof
organik
Kemotrof
Oksidasi
CO2
Thiobacillus
Kemoautotrof
senyawa
Senyawa
Esherichia
Kemoheterotrof Organik
organik
Oksidasi senyawa organik
2.3.3 Fungsi Nutrisi Untuk Mikroba
Setiap unsur nutrisi mempunyai peran tersendiri dalam fisiologi sel. Unsur tersebut diberikan ke dalam medium sebagai kation garam anorganik yang jumlahnya berbeda-beda tergantung pada keperluannya. Beberapa golongan mikroba misalnya diatomae dan alga tertentu memerlukan silika (Si) yang biasanya diberikan dalam bentuk silikat untuk menyusun dinding sel. Fungsi dan kebutuhan natrium (Na) untuk beberapa jasad belum diketahui jumlahnya. Natrium dalam kadar yang agak tinggi diperlukan oleh bakteri tertentu yang hidup di laut, algae hijau biru, dan bakteri fotosintetik. Natrium tersebut tidak dapat digantikan oleh kation
monovalen yang lain. Jasad hidup dapat menggunakan makanannya dalam bentuk padat maupun cair (larutan). Jasad yang dapat menggunakan makanan dalam bentuk padat tergolong tipe holozoik, sedangkan yang menggunakan makanan dalam bentuk cair tergolong tipe holofitik. Jasad holofitik dapat pula menggunakan makanan dalam bentuk padat, tetapi makanan tersebut harus dicernakan lebih dulu di luar sel dengan pertolongan enzim ekstraseluler. Pencernaan di luar sel ini dikenal sebagai extracorporeal digestion. Bahan makanan yang digunakan oleh jasad hidup dapat berfungsi sebagai sumber energi, bahan pembangun sel, dan sebagai aseptor atau donor elektron. Dalam garis besarnya bahan makanan dibagi menjadi tujuh golongan yaitu air, sumber energi, sumber karbon, sumber aseptor elektron, sumber mineral, faktor tumbuh, dan sumber nitrogen. a. Air
Air merupakan komponen utama sel mikroba dan medium. Funsi air adalah sebagai sumber oksigen untuk bahan organik sel pada respirasi. Selain itu air berfungsi sebagai pelarut dan alat pengangkut dalam metabolisme. b. Sumber energi
Ada beberapa sumber energi untuk mikroba yaitu senyawa organik atau anorganik yang dapat dioksidasi dan cahaya terutama cahaya matahari. c. Sumber karbon
Sumber karbon untuk mikroba dapat berbentuk senyawa organik maupun anorganik. Senyawa organik meliputi karbohidrat, lemak, protein, asam amino, asam organik, garam asam organik, polialkohol, dan sebagainya. Senyawa anorganik misalnya karbonat dan gas CO2 yang merupakan sumber karbon utama terutama untuk tumbuhan tingkat tinggi. d. Sumber aseptor elektron
Proses oksidasi biologi merupakan proses pengambilan dan pemindahan elektron dari substrat. Karena elektron dalam sel tidak berada dalam bentuk bebas, maka harus ada suatu zat yang dapat menangkap elektron tersebut. Penangkap elektron ini disebut aseptor elektron. Aseptor elektron ialah agensia pengoksidasi. Pada mikrobia yang dapat berfungsi sebagai aseptor 3+
elektron ialah O2, senyawa organik, NO3-, NO2-, N2O, SO4 =, CO2, dan Fe . e. Sumber mineral
Mineral merupakan bagian dari sel. Unsur penyusun utama sel ialah C, O, N, H, dan P. unsur mineral lainnya yang diperlukan sel ialah K, Ca, Mg, Na, S, Cl. Unsur mineral yang
digunakan dalam jumlah sangat sedikit ialah Fe, Mn, Co, Cu, Bo, Zn, Mo, Al, Ni, Va, Sc, Si, Tu, dan sebagainya yang tidak diperlukan jasad. Unsur yang digunakan dalam jumlah besar disebut unsur makro, dalam jumlah sedang unsur oligo, dan dalam jumlah sangat sedikit unsur mikro. Unsur mikro sering terdapat sebagai ikutan (impurities) pada garam unsur makro, dan dapat masuk ke dalam medium lewat kontaminasi gelas tempatnya atau lewat partikel debu. Selain berfungsi sebagai penyusun sel, unsur mineral juga berfungsi untuk mengatur tekanan osmose, kadar ion H+ (kemasaman, pH), dan potensial oksidasireduksi (redox potential) medium. f. Faktor tumbuh
Faktor tumbuh ialah senyawa organik yang sangat diperlukan untuk pertumbuhan (sebagai prekursor, atau penyusun bahan sel) dan senyawa ini tidak dapat disintesis dari sumber karbon yang sederhana. Faktor tumbuh sering juga disebut zat tumbuh dan hanya diperlukan dalam jumlah sangat sedikit. Berdasarkan struktur dan fungsinya dalam metabolisme, faktor tumbuh digolongkan menjadi asam amino, sebagai penyusun protein; base purin dan pirimidin, sebagai penyusun asam nukleat; dan vitamin sebagai gugus prostetis atau bagian aktif dari enzim. g. Sumber nitrogen
Mikroba dapat menggunakan nitrogen dalam bentuk amonium, nitrat, asam amino, protein, dan sebagainya. seb againya. Jenis senyawa nitrogen yang digunakan tergantung tergantun g pada jenis jasadnya. Beberapa mikroba dapat menggunakan nitrogen dalam bentuk gas N2 (zat lemas) udara. Mikroba ini disebut mikrobia penambat nitrogen.
2.3.4 Bahan-Bahan Media Pertumbuhan
1. Bahan dasar a.
Air (H2O) sebagai pelarut
b.
Agar (dari rumput laut) yang berfungsi untuk pemadat media. Agar sulit didegradasi oleh mikroorganisme pada umumnya dan mencair pada suhu 45⁰C.
c.
Gelatin adalah polimer asam amino yang diproduksi dari kolagen. Kekurangannnya adalah lebih banyak jenis mikroba yang mampu menguraikannya dibanding agar.
d.
Silica gel, yaitu bahan yang mengandung natrium silikat. Fungsinya juga sebagai pemadat media. Silica gel khusus digunakan untuk memadatkan media bagi mikroorganisme autotrof obligat.
2. Nutrisi atau zat makanan a. Mikroba dapat menggunakan sumber N anorganik seperti urea. Media harus mengandung unsur-unsur yang diperlukan untuk metabolisme sel yaitu berupa unsur makro seperti C, H, O, N, P; unsur mikro seperti Fe, Mg b. Sumber karbon dan energi yang dapat diperoleh berupa senyawa organik atau anorganik sesuai dengan sifat mikrobanya. Jasad heterotrof memerlukan sumber karbon organik antara lain dari karbohidrat, lemak, protein dan asam organik. c. Sumber nitrogen mencakup asam amino, protein atau senyawa bernitrogen lain dan sejumlah vitamin.
3. Bahan tambahan Bahan-bahan tambahan yaitu bahan yang ditambahkan ke medium dengan tujuan tertentu, misalnya phenol red (indikator asam basa) ditambahkan untuk indikator perubahan pH akibat produksi asam organik hasil metabolisme. Antibiotik ditambahkan untuk menghambat pertumbuhan mikroba nontarget/kontaminan.
4. Bahan lain yang sering digunakan dalam pembuatan media a. Peptone, peptone adalah produk hidrolisis protein hewani atau nabati seperti otot, liver, darah, susu, casein, lactalbumin, gelatin dan kedelai.Komposisinya tergantung pada bahan asalnya dan bagaimana cara memperolehnya. b. Meat extract. Meat extract mengandung basa organik terbuat dari otak,limpa, plasenta dan daging sapi. c. Yeast extract. Yeast extract terbuat dari ragi pengembang roti atau pembuat alcohol. Yeast extract mengandung asam amino yang lengkap & vitamin (Bcomplex). d. Karbohidrat. Karbohidrat ditambahkan untuk memperkaya pembentukan asam amino dan gas dari karbohidrat. Jenis karbohidrat yang umumnya digunakan dalam amilum, glukosa,
fruktosa, galaktosa, sukrosa, manitol, dll.Konsentrasi yang ditambahkan untuk analisis fermentasi adalah 0,5-1%.
2.4 KLASIFIKASI MEDIA
a. Penggolongan media berdasarkan sifat fisik (konsistensi)
Medium padat yaitu media yang mengandung agar 15% sehingga setelah dingin media menjadi padat..
Medium setengah padat yaitu media yang mengandung agar 0,3-0,4% sehingga menjadi sedikit kenyal, tidak padat, tidak begitu cair. Media semisolid dibuat dengan tujuan supaya pertumbuhan mikroba dapat menyebar ke seluruh media tetapi tidak mengalami percampuran sempurna jika tergoyang. Misalnya bakteri yang tumbuh pada media NfB ( Nitrogen Nitrogen free Bromthymol Blue) Blue) semisolid akan membentuk cincin hijau kebiruan di bawah permukaan media, jika media ini cair maka cincin ini dapat dengan mudah hancur. Semisolid juga bertujuan untuk mencegah/menekan difusi oksigen, misalnya pada media Nitrate media Nitrate Broth, Broth, kondisi anaerob atau sedikit oksigen meningkatkan metabolisme nitrat tetapi bakteri ini juga diharuskan tumbuh merata diseluruh media.
Medium cair yaitu media yang tidak mengandung agar, contohnya adalah NB ( Nutrient Nutrient Broth), Broth), LB ( Lactose Lactose Broth),TSB Broth),TSB (Trypticase (Trypticase Soy Broth) Broth)
b. Penggolongan media berdasarkan fungsinya
Media diperkaya. Yaitu media yang ditambahi zat-zat tertentu misalnya serum darah ekstrak tanaman dan lain sebagainya, sehinggan dapat digunakan untuk menumbuhkan mikroba yang bersifat heterotrof. Contoh: 1. Buffered Charcoal_yeast Extract Agar With α-ketoglutarat α-ketoglutarat : adalah medium pengaya yang digunakan untuk isolasi legionella spesies dari specimen klinik. Yeast extract dan L-cystein untuk memperkuat pertumbuhan Legionella, sedangkan charcoal mengabsorbsi bahan toksik yang terbentuk dari metabolism organism atau yang terdapat pada medium ini.
Media selektif. Yaitu media yang ditambahi zat kimia tertentu untuk mencegah pertumbuhan mikroba lain (bersifat selektif). Misalnya media yang mengandung Kristal violet pada kadar tertentu dapat mencegah pertumbuhan bakteri gram positif tanpa mempengaruhi pertumbuhan bakteri gram negative. Contoh : 1. Thiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose (TCBS) Agar Plate: TCBS agar plate merupakan medium selektif yang digunakan untuk isolasi spesies vibrio dari specimen berak yang mengandung bakteri campuran. Agar TCBS juga membedakan produksi karakteristik koloni dari spesies vibrio. Secara visual TCBS berwarna hijau tua , berkonsistensi padat yang termasuk dalam media sintesis.
Media diferensial. Yaitu media yang ditambahi zat kimia (bahan) tertentu yang menyebabkan suatu mikroba membentuk pertumbuhan atau mengadakan perubahan tertentu sehingga dapat dibedakan tipe-tipenya. Misalnya media daerah agar dapat digunakan untuk membedakan bakteri homolitik (pemecah darah) dan bakteri non hemolitik. Contoh : 1.
Triple Sugar Iron Iron Agar : media TSI agar merupakan media padat
solid yang tergolong media differensial. Media ini dgunakan
atau
untuk
identifikasi bakteri enteric tidak tidak terbatas terbatas pada salmonella dan shigella.
Media penguji. Media yang digunakan untuk pengujian senyawa atau benda tertentu dengan bantuan mikroorganisme. Misalnya media penguji vitamin, asam amino, antibiotika, residu pestisida, residu detergen, dan sebagainya. Media disamping disusun oleh media dasar untuk kepentingan pertumbuhan dan perkembangbiakan mikroba, juga ditambahkan sejumlah senyawa tertentu yang akan diuji.
Media untuk perhitungan jumlah mikroba. Yaitu media spesifik yang digunakan untuk menghitung jumlah mikroba dalam suatu bahan. Contoh : 1. Natrium agar : Media yang umum digunakan adalah Natrium Agar (NA), yang berbahan baku agar. Agar adalah ekstrak dari rumput laut yang
merupakan karbohidrat. Kompleks penyusun utamanya adalah galaktosa, tidak mengandung nutrisi. Medium solid membutuhkan agar sekitar 1,5 hingga 1,8 %. Sedangkan konsentrasi kurang dari 1 % dari ketentuan tersebut, akan menjadi medium semi solid. Agar solid. Agar bertindak bertindak sebagai agen pemadat yang 0
0
sangat baik karena pada suhu 100 C berupa larutan sedangkan pada suhu 40
C memadat. Oleh Karena itu organisme terutama yang patogen dapat 0
dikultivasi pada temperatur 37,5 C atau sedikit lebih tinggi tanpa rasa kuatir medium akan meleleh. Medium solid mempunyai keuntungan karena dapat memadat sehingga dapat ditumbuhi mikroorganisme dengan menggunakan teknik khusus untuk mengisolasi koloni yang berlainan.
Media khusus. Yaitu media untuk menentukan tipe pertumbuhan mikroba dan kemampuannya untuk mengadakan perubahan-perubahan kimia tertentu.
c. Penggolongan media berdasarkan susunan kimia :
Media anorganik, yaitu media yang tersusun dari bahan-bahan anorganik
Media organik, yaituamedia yang tersusun dari bahan-bahan organik
Media sintetik (media buatan), yaitu media yang susunan kimianya diketahui dengan pasti. Media ini umumnya digunakan untuk mempelajari kebutuhan makanan suatu mikroba.
Media non sintetik, yaitu media yang susunan kimianya tidak dapat ditentukan dengan pasti. Media ini umumnya digunakan untuk menumbuhkan dan mempelajari taksonomi mikroba.
Media alami/non sintetis merupakan media yang disusun dari bahan-bahan alami dimana komposisinya yang tidak dapat diketahui secara pasti dan biasanya langsung diekstrak dari bahan dasarnya seperti: kentang, tepung, daging, telur, ikan sayur, dsb. Contohnya: Tomato juice agar.
d. Berdasarkan bentuk dan wadahnya, medium agar dapat dibagi menjadi :
Medium agar miring, menggunakan tabung reaksi yang dimiringkan sekitar 300º
Medium tegak, menggunakan tabung reaksi yang ditegakkan.
Medium petri dish
e. Media berdasarkan komposisi nutrisi
Media sederhana
: Media yang yang menyediakan persyaratan minimal bagi
bakteri untuk tumbuh, contohnya pepton air, media agar. Nutrisi tersebut mendukung pertumbuhan bakteri yang tidak selektif
Media kompleks
: media yang kompleks, komposisi kimia tidak diketahui
secara tepat, dan kompleks media yang sering dibuat dari bahan yang sangat kompleks, misalnya, cairan tubuh, ekstrak jaringan dan infus, dan pepton
Media kimia terdefinisikan : Jika semua bahan dari medium kultur diketahui, baik secara kualitatif maupun kuantitatif, media ini disebut media kimia terdefinisikan. Media ini memiliki nilai yang besar dalam mempelajari persyaratan gizi atau mikroorganisme dalam mempelajari berbagai macam kegiatan metabolisme mereka.
2.5 SYARAT MEDIA
Keperluan dasar dari suatu media itu adalah adanya sumber energi, sumber karbon, sumber nitrogen, garam-garam dan mineral, pH yang cocok, potensial redoks dan faktor pertumbuhan lainnya seperti vitamin dan asam amino. Bagi organisme bersel tunggal, air sangat penting karena merupakan komponen utama protoplasma serta wahana bagi masuknya nutrient ke dalam sel dan keluarnya sekresi ataupun ekresi dari dalam sel. Di samping itu air juga diperlukan
unuk
berlangsungnya
reaksi-reaksi
enzimatik
di
dalam
sel.
Agar mikroba dapat tumbuh dan berkembang dengan baik di dalam media, diperlukan persyaratan tertentu, yaitu: 1. Tingkat keasaman (pH) Kebanyakan mikroba tumbuh baik pada pH sekitar netral dan pH 4,6 – 4,6 – 7,0 7,0 merupakan kondisi optimum untuk pertumbuhan bakteri, sedangkan kapang dan khamir tumbuh pada pH yang lebih rendah. 2. Suhu Suhu merupakan salah satu faktor lingkungan yang berpengaruh terhadap pertumbuhan mikroba. Setiap mikroba mempunyai kisaran suhu dan suhu optimum tertentu untuk pertumbuhannya. Berdasarkan kisaran suhu pertumbuhan, mikroba dibedakan atas tiga kelompok sebagai berikut: a) Psikrofil, yaitu mikroba yang mempunyai kisaran suhu pertumbuhan pada o suhu 0-20 C.
o
b) Mesofil, yaitu mikroba yang mempunyai kisaran suhu pertumbuhan 20- 45 C. o c) Termofil, yaitu mikroba yang suhu pertumbuhannya diatas 45 C. o
Bakteri pathogen umumnya mempunyai suhu optimum pertumbuhan sekitar 37 C, yang juga adalah suhu tubuh manusia. Oleh karena itu suhu tubuh manusia merupakan suhu yang baik untuk pertumbuhan beberapa bakteri pathogen. Mikroba perusak dan o pathogen umumnya dapat tumbuh pada kisaran suhu 4 – 66 66 C. 3. Nutrient Mikroba sama dengan makhluk hidup lainnya, memerlukan suplai nutrisi sebagai sumber energi dan pertumbuhan selnya. Unsur-unsur dasar tersebut adalah : karbon, nitrogen, hidrogen, oksigen, sulfur, fosfor, zat besi dan sejumlah kecil logam lainnya. 4. Oksigen Mikroba mempunyai kebutuhan oksigen yang berbeda-beda untuk pertumbuhannya. Berdasarkan kebutuhannya akan oksigen, mikroba dibedakan atas 4 kelompok sebagai berikut: a) Aerob, yaitu mikroba yang membutuhkan oksigen untuk pertumbuhannya. b) Anaerob, yaitu mikroba yang tumbuh tanpa membutuhkan oksigen. c) Anaerob fakultatif, yaitu mikroba yang dapat tumbuh dengan atau tanpa adanya oksigen. d) Mikroaerofil, yaitu mikroba yang membutuhkan oksigen pada konsentrasi yang lebih rendah daripada konsentrasi oksigen yang normal di udara.. 5. Tekanan osmosis Suatu tekanan osmose akan sangat mempengaruhi bakteri jika tekanan osmose lingkungan lebih besar (hipertonis) (hipertonis) sel akan mengalami plasmolisis. Sebaliknya tekanan osmose lingkungan yang hipotonis akan menyebabkan sel membengkak dan juga dapat mengakibatkan rusaknya sel. Olah karena itu dalam mempertahankan hidupnya, sel bakteri harus berada pada tingkat tekanan osmose yang sesuai, walaupun sel bakteri memiliki daya adaptasi, perbedaan tekanan osmose dengan lingkugannya tidak boleh terlalu besar. 6. Sterilitas Media harus dalam keadaan steril, artinya sebelum ditanami bakteri yang dimaksud tidak ditumbuhi oleh mikroba lain. Berikut beberapa penjabaran tentang faktor-faktor yang mempengaruhi media : 1. Sterilisasi Media
Bahan media yang telah dilarutkan , baik media cair maupun untuk meda pdat harus dilakukan terlebih dahulu melalui proses sterilisasi menggunakan Autoclave yaitu alat untuk mensterilkan berbagai macam alat dan bahan yang digunakan dalam mikrobiologi menggunakan uap air panas bertekanan. Tekanan yang digunakan pada umumnya 15 Psi atau sekitar 2 atm dan
dengan suhu 121⁰C (250⁰F). Jadi tekanan yang bekerja ke seluruh permukaan benda adalah 15 2
pon tiap inchi (15 Psi = 15 pounds per square inch). Lama sterilisasi yang dilakukan selama 15 menit. dan waktu harus dihitung dimulai ketika suhu telah mencapai 121⁰ C . Setelah di autoclave media harus mencapai suhu sekurangnya 50 ⁰C sebelum dituang ke dalam cawan petri steril (biasanya 25 ml untuk satu cawan petri) sedangkan untuk penambahan bahan-bahan seperti darah, antibiotik, vitamin dan mineral harus ditambahkan pada saat agar dingin sebelum dituang ke cawan petri. Untuk komponen media yang tidak tahan panas dapat dilakukan sterilisasi dengan cara filtrasi membrane.
2. Lingkungan yang dibutuhkan untuk pertumbuhan mikroba
Kondisi lingkungan yang optimal akan mendukung pertumbuhan bakteri pada media pembiakan, empat faktor lingkuangan yang paling penting, yaitu: a) Tersedianya oksigen atau karbondioksida Kebanyakan bakteri klinik adalah terdiri dari bakteri aerob, anaerob fakultatif atau anaerob obligat. Bakteri aerob adalah bakteri yang menggunakan oksigen sebagai reseptor elektron. Bakteri anaerob fakultatif dapat tumbuh pada kondisi aerob dan anaerob. Tetapi untuk bakteri seperti Pseudomonas spp, Neisseria spp, Bordetela spp, Brucella spp dan Francisella spp adalah bakteri obligat aerob yaitu bakteri yang tidak dapat tumbuh tanpa ada oksigen. Sedangkan bakteri yang membutuhkan oksigen dalam jumlah sedikit disebut bakteri mikroaerofilik b) Suhu Bakteri pathogen biasanya tumbuh sangat baik pada suhu yang sama dengan suhu jaringan dan organ tubuh hospes yaitu 37C walaupun demikian suhu pembiakan biasanya berada pada rentang rentan g 35-37C. akan tetapi beberapa bakteri b akteri memerlukan suhu tertentu untuk inkubasinya inku basinya mislnya: campylobacter jejuni (42 C), listeria monocytogenes dan yersinia enterocolitica (dapat tumbuh pada suhu 0 C tapi suhu optimum antara 20 dan 40 C c) pH pH adalah pengukuran konsentrasi ion hydrogen pada lingkungan mikroorganisme.nilai pH 7 menunjukkan kondisi netral, sedangkan pH lebih kecil dari 7 disebut asam dan lebih besar dari 7 disebut basa. Kebanyakan bakteri klinik menyukai kondisi pH diantara pH netral sekitar 6,7-7,5, kebanyakan media yang diperjualbelikan telah mengandung buffer sehingga pengecekan ph sudah tidak diperlukan lagi.
d) Kelembaban Air merupakan komponen yang sudah terdapat dalam media, baik pada media padat ataupun cair tapi untuk penyimpanan dalam jangka waktu yang lama saat pembiakan bakteri akan menyebabkan kehilangan sebagian besar kadar air yang timbul karena proses evaporasi. Kehilangan air dari media dapat mengganggu petumbuhan bakteri melalui dua cara yaitu: 1.
Berkurangnya air yang merupakan komponen penting yang akan digunakan untuk metabolisme bakteri
2. Dengan berkurangnya air maka konsentrasi zat terlarut dalam media akan meningkat, dengan meningkatnya konsentrasi zat terlarut akan meningkatkan tekanan osmotik sehingga akan menekan sel bakteri dan sel akan lisis. Dari penjabaran tentang faktor-faktor yang mempengaruhi media tersebut dapat dijelaskan cara untuk menguji kualitas media yang akan digunakan dalam pertumbuhan baktri yaitu uji kualitas media. Uji kualitas media mencakup aspek yang luas, baik media buatan sendiri maupun media jadi, oleh karena itu penyiapan media harus mendapat perhatian. Hal-hal yang harus diperhatikan : 1. Sampel media dehidrasi ditimbang dan ditambahkan ke dalam aquades dan bebas mineral (aqua DM), lalu dicampur untuk membuat suspensi yang homogen. Kemudian panaskan untuk melarutkan zat-xat dalam medium. Jumlah panas yang digunakan harus diatur hanya cukup sampai membuat larutan yang sempurna, kecuali dinyatakan lain dalam prosedur. Agitasi yang tetap selama proses pemanasan penting sebab bongkahan kecil agar, kecuali dalam suspense, dapat turun ke dasar wadah dan pemecahannya memerlukan jumlah panas yang tinggi. Pemanasan yang lama akan menghasilkan denaturasi
protein, kreamelisasi
karbohidrat, inaktivasi zat-zat gizi dan kehilangan kadar air yang berarti karena penguapan. 2. Media dilarutkan ke dalam wadah yang berukuran cukup dan steril dengan autoklaf, setelah selesai harus segera dikeluarkan dari autoklaf untuk menghindari pemanasan yang lebih lama. Wadah berisi media agar harus dipindahkan ke penangas air o
bersuhu 48-50 C sampai mencapai suhu yang diperlukan. Penyimpanan lebih lama di penangas air harus dihindari.
3. pH setia batch media harus diperiksa dengan pH meter setelah media dibiarkan dingin sampai suhu kamar. Untuk menguji media agar, dapat digunakan electrode permukaan atau electrode biasa. Media yang menyimpang > 0,2 unit pH optimum harus dibuang. 4. Media dapat dituang ke dalam tabung atau cawan petri dalam ruangan bersih atau dibawah aliran udara laminar. Ruangan tersebut harus dijaga cukup terang , bebas dari bahan-bahan lain (kecuali yang diperlukan untuk prosedur pembagian) dan bebas dari lalu lalang selama proses pembagian. Setiap usaha harus dilakuk an untuk mencegah kontaminasi media pada tahap ini. Kualitas media harus diperiksa dahulu sebelum media digunakan . Ada bermacammacam cara untuk menguji mutu media yang telah dibuat , yaitu : a. Secara visual ; yaitu dengan memperhatikan atau melihat warna, kekeruhan dan lain-lain. Contoh : 1. Media gula-gula yang dilengkapi tabung durham bila terlihat gelembung udara berarti sudah tidak dapat dipergunakan lagi. 2. Bila warna media tidak sesuai dengan warna standar maka dicurigai adanya perbedaan pH, untuk itu periksalah dengan menggunakan pH meter. Bila pH media berbeda kurang lebih 0,2 satuan , tambahkan asam atau basa atau dibuat baru. b. Uji sterilitas Uji sterilitas merupakan suatau keharusan terutama pada media yang diperkaya dengan bahan-bahan tertentu seperti agar darah atau agar coklat. Caranya : 1.
Ambil sejumlah 5% dari setiang batch media yang dibuat
2.
Inkubasi selama 2 hari pada suhu 35 C
3.
Bila terdapat pertumbuhan lebh dari 2 koloni kuman per cawan petri pada
o
satu cawan petri atau lebih, berarti seluruh media dari batch tersebut tidak dapat dipakai. c. Penanaman kuman control positif dan control negative Kuman control positif adalah kuman yang seharusnya tumbuh pada media tertentu, sedangkan control kuman negative adalah kuman yang seharusnya tidak tumbuh pada media tertentu.
Bebrapa kesalahan mungkin saja terjadi pada saat pembuatan media , adapun kesalan dan kemungkinan penyebabnya yaitu: 1. Kesalahan nilai pH dapat disebabkan oleh ; o
Pengujian pH diatas suhu kamar (25-27 C)
Terlalu panas dan terlalu lamanya sterilisasi
Tidak lengkapnya larutan pada medium
Kurangnya jumlah air dalam wadah
Penyimpanan media yang kurang tepat atau melebihi tanggal kadaluarsa
2. Kekeruhan , presipitasi (pengendapan) dapat disebabkan oleh :
Kurangnya jumlah air dalam wadah
Terlalu panas dan terlalu lamanya sterilisasi
Tidak tepatnya nilai pH
Tidak lengkapnya larutan
3. Lebih gelap , dapat disebabkan oleh ;
Terlalu panas
Tidak lengkapnya larutan
4. Gel menjadi lembek . dapat disebabkan oleh :
Agar tidak larut
Kurang mencampur
Terlalu lamanya penyimpanan pada suhu 50 C
Terlalu panas pada pH rendah
Kesalahan pada penimbangan
Overdilition dengan inokulum atau suplemen media
o
2. Penurunan pertumbuhan bakteri , dapat disebabkan oleh :
Pemanasan berlebih dan berkepanjangan
Tidak lengkapnya larutan
Terdapatnya zat penghambat (inhibitor) dalam air dan wadah
Penggelapan
Penyimpangan pH
BAB III KESIMPULAN
1. Media pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi (nutrient) digunakan oleh mikroorganisme tumbuh dan berkembangbiak pada media.Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi pada media berupa molekul-molekul kecil yang dirakit unt untuk uk men eny yus usun un kom ompo pone nen n sel elny nyaa. 2. Media berfungsi sebagai tempat tinggal, sumber makanan, dan untuk membiakkan, mengasingkan, mengirimkan dan meyimpan mikroorganisme dalam waktu yang lama di laboratorium, untuk mempelajari sifat-sifat koloni/pertumbuhan mikroorganisme, serta sifat-sifat biokimiawinya. 3. Media tersusun atas bahan dasar (air, agar, silika gel, dan gelatin), nutrisi (unsur makro seperti C, H, O, N, P; unsur mikro seperti Fe, Mg), dan bahan tambahan (darah atau coklat). 4. Media diklasifikasikan berdasarkan konsistensi (solid, semi solid, broth) , berdasarkan fungsi (media diperkaya, media selektif , media differential , media penguji , media khusus) , berdasarkan sifat kimianya (sintesis, (sintesis, non sintesis, organik ,anorganik) , berdasarkan bentuk dan wadahnya ( medium agar miring, medium tegak, medium petri dish , media berdasarkan komposisi nutrisi (media sederhana,media kompleks, media kimia terdefinisikan) 5. Syarat media pertumbuhan adalah mengandung unsur hara (nutrisi), suhu, pH, tekanan osmosis yang sesuai, kelembaban, sterilitas wadah
DAFTAR PUSTAKA
Ali Wardana Sitepu.2012. Sitepu.2012. Media Pertumbuhan Bakteri.Online. http://www.scribd.com/doc/110104586/Media-Pertumbuhan-Bakteri. Diakses pada 22 Maret 2014 Bachtiar Adi S Putra.2013.Lap. Putra.2013.Lap. Pembuatan Media.Online. http://www.scribd.com/doc /145676055/Lap-pembuatan-Media Diakses pada 22 Maret 2014 Hadioetomo, R.S. 1990.Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek. Jakarta: Gramedia. Joe. 2011.Media Pertumbuhan Bakteri 2.Online http://www.scribd.com/doc/53308462/MEDIAPERTUMBUHAN-BAKTERI-2. Diakses pada 22 Maret 2014 Kusnadi, dkk. 2003.Mikrobiologi. Malang: JICA. Schlegel, H. G. 1994. Mikrobiologi Umum. Jogjakarta : Gadjah Mada University Press
