Tanggal/waktu praktikum : Selasa, 01 Mei 2017/10.00-selesai Nama percobaan
: Pemeriksaan HDL
Nama praktikan
: Ita Rosidah
NIM
: 153 145 453 133
Dosen penanggung jawab
: Theosobia Grace Orno,s.si.,m.kes
Teori umum
:
A. Pengertian High Density Lipoprotein ( HDL )
High Density Lipoprotein (HDL) adalah lipoprotein berdensitas tinggi, terutama mengandung protein. HDL diproduksi di hati dan usus halus. HDL mengambil
kolesterol
dan
fosfolipid
yang
ada
di
dalam
darah
dan
menyerahkannya ke lipoprotein lain untuk diangkut kembali atau dikeluarkan dari tubuh (Muray, 2009). Guna menilai tinggi rendahnya HDL, digunakan angka standar dari NCEP ATP III yaitu kadar HDL rendah, < 40 mg/dl dan kadar HDL tinggi, ≥ 60 mg/dl. HDL kolesterol adalah lipoprotein yang mengandung banyak protein dan sedikit lemak. HDL bertindak seperti vacum cleaner yang menghisap menghisap sebanyak mungkin kolesterol berlebih. HDL memungut kolesterol ekstra dari sel-sel dan jaringan-jaringan untuk kemudian dibawa ke hati, dan menggunakannya untuk membuat cairan empedu atau mendaur ulangnya (Mason, 2008). HDL ( High High Density Lipoprotein) Lipoprotein) kolesterol merupakan jenis kolesterol yang bersifat baik atau menguntungkan ( good good cholesterol ), ), karena mengangkut kolesterol dari pembuluh darah kembali ke hati untuk dibuang sehingga mencegah penebalan dinding pembuluh darah atau mencegah terjadinya proses aterosklerosis. Jadi makin rendah kadar HDL kolesterol, makin besar resiko (Mason, 2008).
Juga terdapat hubungan terbalik antara kadar HDL dengan penyakit jantung koroner sehungga rasio kolesterol LDL : HDL merupakan parameter prediktif yang penting (Botham, 2009). Kadar HDL kolesterol dapat dinaikkan dengan mengurangi berat badan, menambah exercise dan berhenti merokok (Anwar, 2004). Beberapa faktor yang diketahui untuk menurunkan kadar aterosklerosis dapat dikaitakan dengan kadar HDL. Sebagai contoh, merokok menurunkan kadar HDL, dan kadar HDL lebih tinggi pada individu yang berolahraga secara teratur. Selain itu wanita pramenopause, yang insidens penyakit jantung aterosklerotiknya lebih rendah daripada pria berusia setara, memiliki konsentrasi HDl yang lebih tinggi, mungkin karena pengaruh hormon seks wanita, estrogen. Setelah produksi estrogen berhenti saat menopause, insiden penyakit jantung pada wanita setara. (Adam, J. 2005) B. Struktur dan Fungsi
HDL adalah partikel lipoprotein yang terkecil, memiliki densitas yang paling tinggi karena lebih banyak mengandung protein dibandingkan kolesterol. Kandungan apolipoprotein terbanyaknya adalah Apo A-I dan Apo A-II. Hati mensintesis lipoprotein sebagai kompleks dari apolipoprotein dan fosfolipid, yang membentuk partikel kolesterol bebas, kompleks ini mampu mengambil kolesterol yang dibawa secara internal dari sel melalui interaksi dengan ATP-binding cassette transporter AI (ABCA1). Suatu enzim plasma yang disebut Lecithincholesterol acyltransferase (LCAT) mengkonversi kolesterol bebas menjadi kolesteril ester (bentuk yang lebih hidrofobik dari kolesterol), yang kemudian tersekuestrasi kedalam inti dari partikel lipoprotein, akhirnya menyebabkan HDL yang baru disintesis berbentuk bulat. Partikel HDL bertambah besar karena mereka beredar melalui aliran darah dan memasukkan lebih banyak kolesterol dan molekul fosfolipid dari sel dan lipoprotein lainnya, misalnya dengan interaksi
dengan transporter ABCG1 dan Phospholipid Transport Protein (PLTP) (Murray, 2009). HDL mengangkut kolesterol sebagian besar ke hati atau organ steroidogenik seperti adrenal, ovarium, dan testis oleh kedua jalur langsung dan tidak langsung. HDL akan dibersihkan oleh reseptor HDL seperti Scavenger Reseptor BI (SR-BI), yang memediasi penyerapan selektif kolesterol dari HDL. Pada manusia, mungkin jalur yang paling relevan adalah yang tidak langsung, yang dimediasi oleh kolesterol ester transfer protein (CETP). Protein ini merubah trigliserida dari VLDL erhadap ester kolesterol HDL. Sebagai hasilnya, VLDL diproses untuk LDL, yang dibuang dari sirkulasi oleh reseptor LDL jalur. Trigliserida tidak stabil dalam HDL, tetapi terdegradasi oleh hepatik lipase sehingga, akhirnya, partikel HDL kecil yang tersisa, yang akan memulai kembali penyerapan kolesterol dari sel. Kolesterol yang ditranspor ke hati akan dieksresikan ke empedu usus baik secara langsung maupun tidak langsung setelah konversi menjadi asam empedu. Pengiriman kolesterol HDL ke adrenal, ovarium, dan testis penting untuk sintesis hormon steroid (Murray, 2009). Beberapa langkah dalam metabolisme HDL dapat berpartisipasi dalam transportasi kolesterol dari lemak-sarat makrofag arteri aterosklerotik, yang disebut sel busa, ke hati untuk sekresi ke dalam empedu. Jalur ini telah disebut transportasi kolesterol terbalik dan dianggap sebagai fungsi pelindung klasik HDL terhadap aterosklerosis. Namun, HDL membawa banyak lemak dan protein, beberapa di antaranya memiliki konsentrasi yang sangat rendah, tetapi secara biologis sangat aktif. Misalnya, HDL dan protein dan konstituen lipid membantu untuk menghambat oksidasi, peradangan, aktivasi endothelium, koagulasi, dan agregasi platelet. Semua sifat ini dapat berkontribusi pada kemampuan HDL untuk melindungi dari aterosklerosis, dan belum diketahui mana yang paling penting (Murray, 2009).
C. Mekanisme HDL (High Density Lipoprotein)
HDL
dilepaskan
sebagai
partikel
kecil
miskin
kolesterol
yang
mengandung apoliprotein (apo) A, C, dan E: dan disebut HDL nascent. HDL nascent berasal dari usus halus dan hati, mempunyai bentuk gepeng dan mengandung apoliprotein A1. HDL nascent akan mendekati makrofaguntuk mengambil kolesterol yang tersimpan di makrofag. Setelah mengambil kolesterol dari makrofag. HDL nascent berubah menjadi HDL dewasa yang berbentuk bulat. Agar dapat diambil oleh HDL nascent, kolesterol (kolesterol bebas) dibagian dalam dari makrofag harus dibawa kepermukaan membrane sel makrofag oleh suatu
transporter
yang
disebut
adenosine
triphosphate-binding
cassette
transporter-1 atau disingkat ABC-1 (Adam,2006). Setelah mengambil kolesterol bebas dari sel makrofag, kolesterol bebas akan diesterfikasi menjadi kolesterol ester oleh enzim LCAT. Selanjutnya sebagian kolesterol ester yang dibawa oleh HDL akan mengambil dua jalur. Jalur pertama ialah ke hati dan ditangkap oleh reseptor SR-B1. Jalur kedua dari VLDL dan LDL dengan bantuan CETP. Dengan demikian fungsi HDL sebagai “penyiap” kolesterol dari makrofag mempunyai dua jalur yaitu langsung ke hati dan jalur tidak langsung melalui VLDL dan LDL untuk membawa kolesterol kembali ke hati (Adam, 2006 ).
D. Rasio Kolesterol Total : HDL Kolesterol
Rasio kolesterol total: HDL kolesterol sebaiknya <4,6 pada laki-laki dan <4,0 pada perempuan. Makin tinggi rasio kolesterol total: HDL kolesterol, makin meningkat resiko (Soeharto, I. 2004). Pada beberapa orang dengan kadar kolesterol total yang normal, dapat menderita SKA juga jika ternyata didapatkan rasio kolesterol total : HDL kolesterol yg meninggi. Sebagai contoh penderita dengan kolesterol total 140-185 mg/dl, HDL kolesterol 20-22 mg/dl, maka rasio kolesterol total: HDL kolesterol > 7. Jadi tidak hanya kadar kolesterol total yang meninggi saja yang berbahaya,
akan tetapi rasio kolesterol total: HDL kolesterol yang meninggi juga merupakan faktor risiko (Anwar, 2004). Pada kenyataannya prediktor yang lebih akurat untuk resiko timbulnya arterosklerosis adalah rasio kolesterol HDL / kolesterol total darah. Semakin tinggi konsentrasi kolesterol HDL dalam kaitannya dengan kadar kolesterol darah total, semakin kecil resiko (Winarno, FG. 20 08). E. Interpretasi Data
Kadar HDL menunjukkan seberapa besar kolesterol baik yang terdapat dalam darah karena HDL berperan dalam tubuh untuk membawa kolesterol dalam darah menuju hati untuk diproses lebih lanjut guna menghindari terjadinya penumpukan kolesterol pada saluran darah. Semakin tinggi kadar HDL dalam darah maka akan semakin baik. Jika sebaliknya, maka patut diwaspadai adanya resiko penyakit jantung. Kadar
HDL
yang
direkomendasikan
menurut
American
Heart
Association, adalah sebagai berikut : No
1
2
Tingkat <40 untuk pria, <50 untuk wanita 40-59
Tingkat mmol / L
<1,03
1,03-1,55
Interprestasi Kolestrol HDL rendah resiko untuk penyakit jantung Tingkat HDL medium Tingkat, HDL yang tinggi,
3
<60
<1,55
kondisi optimal dianggap protektif terhadap penyakit jantung
F. Alat dan Bahan
1. Alat
Mikro pipet 10 , 100
Tip biru
Tip kuning
Tabungreaksi
Centrifuge
Fotometer Zenix
2. Bahan
Reagen HDL
Standar HDL
Aquades
G. Cara kerja
1. Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan 2. Persiapan reagen presipitasi a. Di campurkan reagen presipitasi sebanyak 4 bagian dengan akuades 1 bagian b. Di pipet 500 mikro dari reagen preipitasi di campur dengan 200 mikro sampel c. Di inkubasi selama 10 menit pada suhu ruang setelah itu di centrifugasi kembali setelah 10 menit dengan kecepatan 400 rpm d. Setelah centrifugasi, di pisahkan antara supernatant dan presipitat, supernatant tersebut yang akan di gunakan untuk pemeriksaan HDL 3. Di siapkan 4 tabung reaksi
Tabung I : akuades 100 mikrin + reagen 1000 mikron ( blanko air )
Tabung II : 1000 mikro reagen ( blanko reagen )
Tabung III : 1000 mikro standar + 1000 reagen
Tabung IV : tabung sampel, 100 mikro supernatant + 1000 reagen
4. Di inkubasi 5 menit pada suhu 37 oC kemudian di periksa pada panjang gelombang 546 nm.
H. Data pengamatan
Sampel 100 ml supernatant + 100 ml reagen I 100 ml supernatant + 100 ml reagen II
Analisis Data : C. Sampel I : 175 = 175
. . 2,999 ,9
= 175 0,400 = 70 / C. Sampel II : 175 = 175
. . 3,39 ,9
= 175 0,0448 = 78 /
A. Sampel
A. Standar
C
Ket.
2,999
7,49
70 mg/dl
Normal
3,359
7,49
78 mg/dl
Normal
I. Pembahasan
High-Density Lipoprotein (HDL) merupakan salah satu dari lima kelompok utama Lipoprotein yaitu : kilomikron, VLDL, IDL, LDL, dan HDL, yang memungkinkan tranportasi lemak seperti kolesterol dan trigliserida sekitar sel, termasuk darah. Kolesterol HDL juga dikenal dengan kolesterol “baik”. Kadar kolesterol merupakan ukuran penting kesehatan Antung, yaitu dengan menurunkan kolesterol, akan tetapi penting untuk diingat bahwa meningkatkan kolesterol HDL dapat mengurangi resiko penyakit jantung. Kolestrol HDL disebut lemak yang baik karena bisa membersihkan dan mengangkut timbunan lemak dari dinding pembuluh darah ke hati. Kolestrol HDL yang ideal harus lebih tinggi dari 40 mg/dl untuk laki-laki, atau di atas 50 mg/dl untuk perempuan. Penyebab kolestrol HDL yang rendah adalah kurang gerak badan, terlalu gemuk, serta kebiasaan merokok. Selain itu hormon testosteron pada laki-laki, steroid anabolik, dan progesteron bisa menurunkan kolesterol HDL, sedangkan hormon estrogen perempuan menaikkan HDL. Tujuan
dari
praktikum
ini
yaitu
menentukan,
mengetahui
dan
mendiagnosa adanya gangguan fisiologis tubuh dan keadaan kolesterol dalam tubuh dengan menggunakan beberapa parameter pemeriksaan trigliserida dan kolesterol /HDL (High density Lipoprotein) dalam serum. Pada pemeriksaan HDL kolesterol, sampel yang digunakan juga plasma darah. Sebelumnya, kami membuat supernatan dahulu, yaitu plasma darah sebanyak 500 µL ditambahkan dengan reagen HDL. Reagen tersebut akan mengendapkan partikel – partikel lipoprotein selain HDL. Setelah diinkubasi dan dicentrifuge, supernatan siap untuk digunakan dalam pemeriksaan HDL. Prinsip dari percobaan ini adalah Kilomikron, VDL ( Very Low Density Lipoprotein ) dan LDL ( Low Density Lipoprotein ) diendapkan dari penjumlahan phosphotugistic acid dan magnesium klorida. Setelah supernatan disentrifuge,
cairan terdiri dari sedikit HDL sedangkan kolesterol ditentukan dari proses enzimatis. Kadar HDL yang didapat pada sampel I adalah 70 mg/dl dan pada sampel II adalah 78 mg/dl. Kadar ini digolongkan dalam keadaan normal. Kadar HDL wanita adalah < 50 mg/dl, laki – laki < 40 mg/dl dan kadar HDL tinggi > 60 mg/dl. Kadar HDL menunjukkan seberapa besar kolesterol baik yang terdapat dalam darah karena HDL berperan dalam tubuh untuk membawa kolesterol dalam darah menuju hati untuk diproses lebih lanjut guna menghindari terjadinya penumpukan kolesterol pada saluran darah. Kolesterol HDL < 40 mg/dL (1,04 mmol/L)
Rendah
>60 mg/dL (1,56 mmol/L)
Tinggi
Semakin tinggi kadar HDL dalam darah maka akan semakin baik. Jika sebaliknya, maka patut diwaspadai adanya resiko penyakit jantung. J. Kesimpulan
Berdasarkan percobaan yang telah di lakukan dapat di simpulkan bahwa kadar Hdl yang di peroleh di anggab baik dengan hasil yaitu pada sampel I dengan kadar 70 mg/dl dan pada sampel II dengan kadar 78 mg/dl.
DAFTAR PUSTAKA
Adam, J. (2005) Peningkatkan Kolesterol HDL, Paradigma Baru Penatalaksanaan Dislipidemia. Jurnal Medical Nusantara. 26(3): 200 – 2004.
Anwar, Bahri. 2004. Dislipidemia Sebagai Faktor Resiko Jantung Koroner. Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara
Mason, Peter. 2008. Tourism Impact, Planning and Management. Oxford: Butterworth - Heinemann
Murray, R. K., Granner, D. K., & Rodwell, V. W. Biokimia harper (27 ed.). Jakarta: Buku Kedokteran EGC; 2009
Soeharto, I. (2004) Serangan Jantung dan Stroke hubungannya dengan lemak dan Kolesterol . PT Gramedia Pustaka. Jakarta.
Winarno, FG. 2008. Kimia Pangan dan Gizi Edizi terbaru. Bogor : M.Brio Press
