UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHOMANN FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA ACADÉMICA PROFESIONAL DE ENFERMERÍA I UNIDAD LABORATORIO NRO. 13 DETERMINACION DE GLUCOSA EN SUERO
Objetivos: Determinar la concentración de la glucosa en una muestra de suero , utilizando un kit comercial basado en el método GOD-POD.
Base teórica: La glucosa es el glúcido principal del cuerpo y todos los otros glúcidos se convierten en glucosa después de su digestión y absorción. Los niveles de glucosa en sangre se mantienen entre unos límites muy estrechos y constantes gracias a la acción de dos hormonas: insulina y glucagón. En general, dichos valores nunca deben sobrepasar los 200 mg/dl. , por grande que sea la ingestión de hidratos de carbono, ni descender por debajo de 50 mg/dl en condiciones fisiológicas interpretación de los datos de laboratorio.
Hiperglucemia: Hiperglucem ia: entre las alteriones que cursan con hiperglucemia hiperglucemi a podemos citar: Diabetes mellitus: síndrome caracterizado por un aumento en los niveles fisiológicos fisiológic os de la glucosa y que cursa de manera característica característ ica con polifagia, poliuria y polidipsia. Disminución de la tolerancia a la glucosa: glucemias basal inferior a 140 mg/dl y, a las dos horas de sobrecarga oral de glucosa, valores intermedios entre los fisiológicos y los típicos de la diabetes. hipoglucemias: hipoglucemia s: hablamos de hipoglucemia cuando los niveles de glucosa en sangre se sitúan entre 40 y 45 mg/dl. La hipoglucemia puede presentarse en ayunas, o bien ser reactiva a la ingestión de alimentos o a la toma de medicamentos.
Materiales- Reactivos: Reactivo 1 Solución tampón
TRIS pH 7.5 Fenol
Reactivo2 Standard 100 mmol/ul Glucosa
Glucosa oxidasa Peroxidasa 4- Aminofenazona Aminofenazona
ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS Disolver las enzimas del R2 en el contenido R1
92 mmol/L 0,3 mmol/L 18000 U/L 1000 U/L 2.5 mmol/L
Esta solución mono reactiva es estable 1 mes a 2,8 °C o 7 dias a temperatura ambiente, al abrigo de la luz
Preparación del reactivo: Disolver los enzimas del R2 en el contenido R1 Esta solución mono reactiva es estable 1 es a 2,8 °C o 7 días a temperatura ambiente, al abrigo de la luz.
Técnica Blanco Standard Muestra Standard -20 ul/L -Muestra --20 ul/L Reactivo 2.00 ml 2.00 ml/L 2.00 ml/L Mezclar e incubar 10 min. A 37 °C o 30 min. a temperatura ambiente. Lectura a 505 nm. (490-550), frente a blanco de reactivo coloración estable 30 minutos a temperatura ambiente.
Calculo: D. Op Muestra Mg/ dl glucosa = __________________ D. Op Standard mg/ dl x 0.0555 = mmol/L
x conc. Standard
Linealidad El método es lineal hasta valores de 500 mg/dl si la concentración de glucosa es superior a 500 mg/dl. Diluir la muestra a 1;2 con solución salina y multiplicar el resultado por 2 calores normales de 55 a 110 mg/dl (3.05 – 6.11 mol/L)
Conclusión No se ha observado interferencias por hemoglobina (4g/L), bilirrubina (20 mg/L), creatinina (100mg/L), galactosa (1g/L) y EDTA (2 g/L)
III.
CUESTIONARIO: 1. Si la concentración de glucosa hubiera sido superior a 500 mg/dL. ¿Cómo habría actuado? Desde el límite de detección de 0,04 mg/dL hasta el límite de linealidad de 500 mg/dL. Sila concentración es superior al límite de linealidad, diluir la muestra 1:2 con NaCl 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2
Sensibilidad analítica: 1mg/dL = 0,0036 A Exactitud:
Los reactivos de SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemáticas significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x).Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron las siguientes:
Coeficiente de correlación (r):0,99. Ecuación de la recta de regresión: y = 1,0x + 0,12.
Las características del método pueden variar según el analizador utilizado Interferencias: No se han observado interferencias con: hemoglobina hasta 4 g/L, bilirrubina hasta 20 mg /L, creatinina hasta100 mg /L, galactosa hasta 1 g /L. Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la determinación de la glucosa. 2. Para la determinación ha utilizado un método enzimático. ¿Se trata de un método cinético? Justifique su respuesta Sí; El centro activo está formado por un grupo de funciones de contacto establece las funciones de la enzima y el sustrato.la actividad catalítica de las enzimas se encuentra sometida a diversos tipos de regulación; casi todas las enzimas inhiben sus productos a altas catalizaciones algunas se sintetizan en forma de precursores inactivos y se activan después generalmente por proteólisis. Cinética enzimática Es una parte de la bioquímica encargada de estudiar las velocidades de reacción de las enzimas que son catalizadores por las enzimas, la cinética enzimática es una de las técnicas más viejas para entender los mecanismos enzimáticos. Mecanismos enzimáticos Los mecanismos enzimáticos pueden ser divididos en mecanismo de único sustrato o mecanismo de múltiples sustratos. Los estudios cinéticos llevados a cabo en enzimas que solo unen un sustrato, como la triosafosfato isómerasas, pretenden medir la afinidad con la que se une el sustrato y la velocidad con la que lo transforma en producto. Por otro lado, al estudiar una enzima que une varios sustratos, como la dihidrofolato reductasa, la cinética enzimática puede mostrar también el orden en el que se unen los sustratos y el orden en el que los productos son liberados. No obstante, no todas las catálisis son llevadas a cabo por enzimas proteicas. Existen moléculas catalíticas basadas en el ARN, como las ribosomas y los ribosomas, esenciales para el splicing alternativo y la traducción del ARNm, respectivamente. La principal diferencia entre las ribozimas y los ribosomas radica en el limitado número de reacciones que pueden llevar a cabo las primeras, aunque sus mecanismos de reacción y sus cinéticas pueden ser estudiados y clasificados por los mismos métodos.
