NOMBRE: 1ndres
Felipe /edo!a
$a%erde CFTR El CFTR o regulador de la conductancia transmembrana de la fbrosis quística es un canal que transporta iones de cloro hacia el espacio extracelular, el nombre de este canal se debe a que las mutaciones en el gen con el mismo nombre (CFTR) producen la aparición de la fbrosis quística una patología que aecta en su ma!or parte a la población cauc"sica# $a fbrosis quística es una enermedad que altera la fsiología del mo%imiento del cloro ! se presenta en las personas de maneras en las que ha! una acumulación de moco, este trastorno es potencialmente mortal ! se da cuando ambos alelos codifcantes est"n da&ados ESTRUCTURA,
la proteína pro%iene específcamente en las c'lulas epiteliales de los mamíeros, esta proteína tiene un marco de lectura abierto grande que predecía una olip'ptido de *+ amino"cidos# amino"cidos# -u característica característica m"s ob%ia es la presencia de %arias secuencias helicoidales helicoidales hidróobas que atra%iesan la membrana, las cuales .ndican que era probablemente que uese una proteína de membrana integral# en la /0squeda de proteínas las secuencias re%elaron una homología con un grupo de transporte acti%o de roteínas# $a homología de secuencia primaria se restringió a regiones de 1proximadamente 2 residuos que constitu!en pliegues de unión a nucleótidos, 1dem"s, existen potenciales similitudes en la estructura secundaria en $as disposiciones de las h'lices transmembrana predichas de las cuales uede ser seis en cada mitad de la mol'cula# 3na característica característica que es 0nica para una gran 4 clase di%ersa de transportistas procariotas ! eucariotas es la aposición 5e estos dos dominios, ! por lo tanto el t'rmino de s0per amilia ha sido 1plicado# FUNCION.
$os canales CFTR se encuentran en la membrana apical de las c'lulas epiteliales de todo el cuerpo, donde 6uegan un papel %ital en el transporte de mol'culas ! electrolitos# $os canales se abren ! cierran, en un proceso din"mico llamado 7gating7, para transportar cloruro (Cl8) 4 el bicarbonato (9C:;8) de las c'lulas epiteliales# El ?1 > 1T 1T Cl8canal regulado que tambi'n controla la unción de otras proteínas de membrana# 1parte del los !a conocido eectos de los eectos de CFTR sobre la conductancia de @a A epitelial, tambi'n se ha inormado anteriormente que el CFTR inhibeCa8B acti%adas por CaB, en el endotelio de la arteria pulmonar 4 las c'lulas acinares acinares parotídeas aisladas, por un mecanismo desconocido# 1dem"s de esto, los canales de aniones regulados por el %olumen ueron inhibidos por la expresión de CFTR# Estudios adicionales demostraron que la regulación negati%a de CFTR dio como resultado una Regulación negati%a de c1=, CaB ! de %olumen regulado a la conductancia del cloro# SINTESIS
el gen CFTR est" uertemente plegado sobre sobre si mismo en un -3ER enrollamiento enrollamiento de 15@ que orma el cromosoma# $a expresión del gen CFTR se inicia mediante se&ales celulares que instru!en al cromosoma para que este se desenlace ! pueda re%elar el gen CFTR luego 3na copia port"til del gen se hace en orma de 1R@ mensa6ero8$a cadena de mR@1 pasa pasa a tra% tra%'s 's de un por poro nucl nuclea earr en el cito citopl plas asma ma para para come comen nar ar el proc proces eso o de traducción# $os ribosomas tienen la unción de leer ! traducir la secuencia del 1R@m a una cade ca dena na poli poli pept peptíd ídic ica a de am amin ino" o"ci cido dos# s# Cuan Cuando do se lee lee la se&a se&all fnal fnal o el codó codón n de
detención, el ribosoma libera la cadena polip'ptidica con un CFTR completamente extendido, que se pliega para ormar un canal CFTR inmaduro# 5espu's de la traducción de proteínas, la proteína CFTR inmadura sure modifcaciones postraduccionales en el aparto de olgi, esta proteína inmadura puede surir %arios tipos de modifcaciones postraduccioales inclu!endo osorilacion ! la palmo ilación de la cual se hablar" m"s adelante# 5urante este proceso, la estructura tridimensional de la proteína contin0a desarroll"ndose a tra%'s de una serie de modifcaciones químicas que ocurren en el aparato de olgi para su correcto uncionamiento# Esto culmina con una proteína que ha surido !a sus modifcaciones postraduccionales ! que esta lista para e6ercer su unción como canal, pero es necesario trasportarla a la membrana plasm"tica ! se hace de manera que se empaqueta en una %esícula para su transporte a la superfcie celular# 5espu's de la modifcación postraduccional, el CFTR se en%asa en %esículas para su transporte a la superfcie celular# Esto se llama tr"fco de proteínas# Finalmente, la %esícula que transporta proteína CFTR se usiona con la membrana, permitiendo la expresión superfcial de CFTR# El CFTR puede comenar inmediatamente a uncionar como un canal iónico# El plegado ! la maduración de CFTR normal ! deltaF2+8 CFTR son algo dierentes# En ambos casos, el plegamiento comiena cuando el comple6o oligosac"rido transerasa (comple6o :-T) se une a la proteína CFTR o deltaF2+8CFTR reci'n sintetiada a tra%'s de secuencias de consenso que se insertan co8traduccionalmente en el retículo endopl"smico Ramifcado de * unidades Este proceso se conoce como @8glicosilación o n0cleo8 glicosilación Entonces, la ma!or parte del deltaF2+8 CFTR se degrada a tra%'s de la ubiquitinación dependiente de la proteína + de choque t'rmico# 1 dierencia del deltaF2+8 CFTR, el CFTR prosigue en la ruta de plegado a tra%'s de una interacción de sus residuos @8glicosilo# El resto glicano es reconocido por cualquier lucosidasa . ! .., que recubre secuencialmente dos residuos de glucosa# $as lucosidasas exactas que participan en este proceso son desconocidas# $a estructura oligosac"rida monoglucosilada es entonces reconocida por la lectina Calexina# MPT
almitoilacion es una modifcación postraduccional co%alente, que típicamente es re%ersible Conocida por regular di%ersos aspectos de la biog'nesis de proteínas de membrana de articular importancia para los mecanismos que sub!acen# En numerosas proteínas de membrana, inclu!endo ion 4 un transportador de la misma amilia de genes que CFTR,la almitoilacion ha demostrado mediar la maduración ="s all" del ER, en la localiación en la membrana plasm"tica, el canal iónico Fosorilación, el reciclado de la superfcie celular ! la proteína de 1cti%ación# 5ebido a que la mutación com0n en CF interrumpe muchos 5e estos mismos procesos, la identifcación de sitios específcos para almitoilacion puede proporcionar una nue%a %isión de la Función de mutantes de tipo sal%a6e ! com0nmente obser%ados Formas de CFTR# 5el mismo modo, el hallago de CFTR m0ltiple -itios de metilación sugiere una regulación pre%iamente rele%ante para la biog'nesis ! > o ion de con 1cti%idad para el canal# $a metilación de proteínas es bien reconocida por -u unción epigen'tica durante la modifcación de las histonas, ! ha! Tambi'n una creciente apreciación de las ormas en que el grupo metilo ueden in
$as c'lulas se lisaron en un tampón osato que conteníaB de glicerol, de @aCl, arginina, "cido glut"mico ! 1T con =gClB ! E5T1 .nhibidor de roteasa usando una
prensa rancesa# $as c'lulas lisadas lisados se sedimentaron a * rpm seguido de ultra centriugación 1 *# rpm durante D8+ h# $a racción de membrana se recogió ! se solubilió usando una 5ounce ! tampón de osato como anteriormente se hio, Con de @aCl ! de Fos8colina *# $a mecla de extracción se sedimentó a B rpm en un rotor, ! el sobrenadante 5iluido a una concentración fnal de Fos8colina * mediante la adición de osato B2 Gue contiene B de glicerol, de @aCl, de arginina, Hcido glut"mico ! 1T#Con un prela%ado de Resina @íquel 3na plataorma giratoria a *+IC durante la noche# El lisado ! la resina ue por centriugación a + rpm en un rotor de cuchara oscilante a *+IC ! el sobrenadante no unido se decantó# $a resina se aplicó a una columna ! se la%ó Fosato que contiene B de glicerol, @aCl, de arginina, de "cido glut"mico, 1T ! Fos8 colina *# $a elución ue :btenida por gra%edad usando gradientes escalonados ! dos o un 1JtaCromatograía con imidaol# $as racciones ueron dot blotted, -e reunieron ! se concentraron hasta ml o menos, seguido por el tama&o or cromatograía de exclusión usando tampón de elución, @aCl, =gCl, glicerol al 2 55= sin imidaol# El 1grupado $as racciones se realiaron sobre dodecilsulato sódico8Electrooresis en gel de poliacrilamida (-5-81E) para Kesternblotting ! coloración con Coomassie /lue# $a concentración total de la roteína se e%aluó mediante el ensa!o de /C1 de precipitación# Tambi'n se utilió un protocolo de purifcación alternati%o con 55=#
E-TR3CT3R1
R.=1R.1
REFERENCIAS
Seibert, F. S., Loo, T. W., Clarke, D. M., & Riordan, J. R. (1997). Cyti! "ibroi# C$annel, !atalyti!, and "oldin% roertie o" t$e CFTR rotein. Journal of Bioenergetics and Biomembranes, 29('), 9* . $tt#++doi.or%+1.1-+#17//1 0ollo!k, ., Cant, ., Ri2in%ton, T., & Ford, R. C. (1). 03ri"i!ation o" t$e Cyti! Fibroi Tran2e2brane Cond3!tan!e Re%3lator 0rotein 45reed in Sa!!$aro2y!e !ere6iiae. Journal of Visualized Experiments : JoVE , (/7), 1*/. $tt#++doi.or%+1.-791+'17 3in%a8at, J., on%3$ol, 0., S!$reiber, R., & 3n:el2ann, . (11). CFTR and TM4M1; are earate b3t "3n!tionally related Cl < !$annel. Cellular Physiology and Biochemistry, 2(), 71'* 7. $tt#++doi.or%+1.11'9+--'7;' Moran, ., & =e%arra.>!"./.'.M!Cl3re, M., DeL3!a, L. J., Wilon, L., Ray, M., Ro8e, S. M., W3, ?., @ Aarne, S. (1). 03ri"i!ation o" CFTR "or 2a e!tro2etry analyi# Bdenti"i!ation o" al2itoylation and ot$er ot
